1.确定是否为库欣综合征：依据典型临床表现;实验室检查皮质醇水平增高和昼夜节律消失;24小时尿游离皮质醇(UFC)排出量增高;小剂量地塞米松抑制试验或过夜地塞米松抑制试验时增高的尿或血皮质醇水平不被抑制是库欣综合征必需的确诊试验。难以确诊者可考虑胰岛素低血糖试验，如血ACTH及皮质醇水平无明显上升可帮助诊断。
2.病因诊断：是确立治疗方案的关键。方法：
①大剂量地塞米松抑制试验，库欣病服药第二日24小时尿UFC在80%的患者被抑制到对照日的50%以下，而肾上腺肿瘤及异位ACTH综合征大都不被抑制。过夜大剂量地塞米松抑制试验意义相似;
②血ACTH水平在肾上腺肿瘤时降低，库欣病时升高，异位ACTH综合征时更高;
③CRH兴奋试验及静脉导管分段取血测定ACTH在诊断困难的病例有帮助;
④MRI、CT、B超及核素标记的奥曲肽显像等影像学检查对病因鉴别诊断和肿瘤定位必不可少，无论垂体腺瘤、肾上腺肿瘤或异位ACTH分泌肿瘤。
